色谱手动积分指南

指在信号中确定峰并计算其大小，积分包括以下操作及步骤：识别、校正、定量。

对于某个信号进行积分时，软件将识别每个峰的开始和结束时间，并用竖线标记这些点，寻找每个峰的峰顶点，确定保留时间/迁移时间，建立基线，以及计算每个峰的峰面积、峰高和峰宽。这些过程积分事件的参数控制。

自动积分功能为设置初始事件提供开始点。自动积分功能设置以下参数：初始斜率灵敏度（阈值）、初始峰高、初始峰宽、初始最小峰面积。

此类型的积分允许对选定的峰或峰组进行积分，在指定的手动积分范围内，将忽略此软件的事件积分（初始最小峰面积除外）。如果手动积分出来的一个或多个峰低于最小峰面积阈值，则此积分将被废弃。手动积分时间使用绝对时间值。它们不会为信号漂移作调整。

在报告中，手动积分提供以下功能：

§ 划基线：指定为一个峰或一组峰划基线的位置；

§ 负峰：指定何时将基线以下的面积当作负峰处理；

§ 切线撇去：计算从主峰切线撇去的峰面积；

§ 分裂峰：指定用垂线分裂峰的点；

§删除峰：从积分结果中删除一个或多个峰。

自动积分主要是修改以下4个积分参数实现的，具体如下：

也称阈值，指设置信号斜率的值，该斜率用于识别积分过程中峰的起点和终点。如何信号斜率大于“斜率灵敏度”值，将建立峰起点，如果信号斜率降到“斜率灵敏度”以下，将建立峰止点。

设置值越低，峰响应越灵敏，当然，不同品牌的仪器对设置值的响应程度会有所区别。

用于控制积分器的选择性以区分峰与基线噪音。如果设置的初始峰宽太小，则可能将噪音当作峰。如果宽峰与窄峰混在一起，可以选用运行时间编程事件设定特定的峰宽。

根据峰面积来设置小于目标峰面积的峰将不被积分也不会报告；

最小目标峰的高度，任何小于最小峰高的峰将不被积分及报告。

1.低分离度或低响应；

2.流动相不稳定，基线紊乱，保留时间变化小； 

3.运行过程中，出现异常峰； 

4.软件积分的局限性，如由于软件参数阈值的设置导致峰未积分，峰起点和终点间出现肩峰和异常的基线漂移，软件错误；

5.由于样品母体的干扰导致的复杂色谱图，裂峰、目标杂质的同时洗脱/肩峰、基线噪音、负峰、基线上升或下降、峰的严重拖尾、烃类的存在导致自动积分不正确。

能进行手动积分吗？答案是肯定的，可以进行手动积分，但手动积分必须在受控的情况下进行。一般情况下，应采用自动积分方式，不可以手动积分。特殊情况下，若是目标峰实在无法自动积分的，即对于采取高级积分的方式还不能将峰有效的积分，经申请与批准后，可以进行手动积分。

此外必须严格控制手动积分次数，因为如果一套好的分析方法，峰与峰之间分离较好，根本是不需要手动积分，如果需要手动积分的图谱，分析方法必定不好。

单个杂质及总杂质的定量测定，选择合适的阈值设置和合适的条件进行积分是很重要的。这种情况下，峰值可忽略通常设为0.05%。因此，数据采集系统的阈值设置至少相当于这个限制的一半（0.025%）。对任何未与主峰完全分离的杂质进行积分，最好采用峰谷对峰谷外推法(切向撇去法)。”

积分方法是否需要固定？个人认为应该分情况，分析方法验证期间时积分参数摸索期，通过整套分析方法验证过程来确定积分参数，这期间没有修改积分参数之说，因为本身就没有积分方法。放行检测的积分方法可以先根据验证情况进行确定，之后所有检测的积分方法应该是固定，任何修改积分参数的行为应该进行申请，批准后方可修改。

稳定性考察为了反映杂质的趋势，积分方法可以与放行方法不同，但不同时间点的积分方法应该相同，任何修改，同样需要申请及批准。

目前的色谱系统，均有审计追踪，当我们对积分方法进行修改时，均会出现“comment”，要求输入具体的修改内容。

含量溶出度以及含量均一性包含了对单一分析物/峰按照已知标准进行计算的分析项目。在这些类型的分析项目中，都期望其具有准确和精确的系统适应性特征的高斯峰。正常的高斯峰应该确切地从色谱峰起始位置开始积分到截止为止结束积分。图 6.3.7-5a-5f 展现了这些类型测试代表性的峰积分。

图 6.3.7-5a是单组分分析的未处理的信号峰。图 6.3.7-5b表示的是对原始数据以适当的积分事件进行积分并以可见的比例呈现。图 6.3.7-5c 表示的是通过修整积分而产生了低面积的峰。图 6.3.7-5d表示的是对原始数据用不适当的积分事件进行积分会表达更多的面积。

在这些图示中，所有的积分都是通过调整色谱软件的积分事件来完成的。色谱软件会标示出哪些峰是手动积分的。实验室应该有适当的控制措施以检测应用了错误的积分事件而造成的数据损毁。

Figure 6.7.7-6a-6c 和Figure 6.7.7-7a-7c展示的是成分分析/色谱纯度分析这种多组分分析（峰组）中的发生的积分错误。这两种情况下，报告的峰面积都会减少。